( 一 )RNA 提取前准备工作
1. 玻璃仪器、称量匙、研钵均干烤灭活RNA 酶 (RNase),240℃干烤4h 。试剂均用 DEPC 溶液配制。
2. 提取过程中的所有材料，如EP 管、吸头、手套等均为无RNase 的一次性塑料制品。
3.电泳槽清洗后灌满3%的H₂O₂ 溶液，室温放置30 min 以上，然后用0.1%的DEPC 溶液彻底冲洗电泳槽。
4.戴手套、帽子和口罩进行操作，避免唾液及汗液等含RNase 的污染，争取创造一个 无RNase 的环境。
5.清洁研钵：先用自来水冲洗，再用去离子水冲洗，用软纸轻轻擦干。
(二)提取总RNA
1. 组织准备：将50~100 mg 组织块从-70℃冰箱转移至液氮中。
2. 充分研磨：在研钵中加入液氮至研钵体积的1/3,然后将标本放入研钵中，加入1ml Trizol, 快速研碎，移入EP 管内。
3. 加入0.2ml 三氯甲烷，剧烈振摇15s, 室温静置3min。
4.13000r/min 、4℃离心15 min。
5. 吸出上层约400 μl 水移至另一EP 管中，加入0.5 ml 异丙醇，轻微混匀，室温静置 10 min。
6.13000 r/min 、4℃离 心 1 5min 。弃上清，留沉淀，3000 r/min 离心数秒钟，吸尽液体。
7. 加入1ml 75%乙醇，轻轻振摇以重悬RNA沉淀。
8.13000 r/min 、4℃离 心 5min, 弃上清，留沉淀，吸尽液体。
9. 室温干燥5~15min, 干燥RNA 沉淀成半透明状。
10. 加入适量0.1%DEPC溶液，混匀后测定RNA 浓度，检测RNA 完整性及准备反转录。
(三)鉴定提取RNA的完整性
1.琼脂糖凝胶电泳制备胶模：用胶带将塑料胶盘开口的两端封住，放在工作台的水平 位置上。
2. 配制所需浓度的琼脂糖凝胶溶液及1×TAE 电泳缓冲液。
3.称量所需的琼脂糖粉于三角锥瓶内，置于微波炉中将琼脂糖悬浮液加热直至其完全 溶解。
4. 使琼脂糖溶液冷却至60℃左右，加入溴化乙啶(EB) 至终浓度为0.5μg/ml 充分混匀。
5. 灌胶：在距离塑料胶盘底板0.5~1.0 mm 的位置上放置合适的梳子，将温热的琼脂糖 溶液连续倒入胶模中。凝胶的厚度以3~5mm 为宜，注意检查梳子的齿下或齿间是否有气泡。
6. 室温放置30～45min, 待凝胶完全凝固后移去两端胶带并放入电泳槽中。
7. 加入足量1×TAE电泳缓冲液，使其恰好没过凝胶面约1mm。
8. 静置1~2min 后，小心拔除梳子。
9. 上样：DNA 样品与10×凝胶加样缓冲液混合后缓慢加至样品槽中。
10.电泳：恒压1~5 V/cm, 约40 min。
(四)提取RNA的完整性的测定
用0. 1%的DEPC溶液制备1.5%琼脂糖凝胶；将2 μl 所提取的RNA 、3μl 0.1%的 DEPC溶液及1 μl 10×加样缓冲液混匀，上样，70 V 恒压电泳30 min, 用紫外透射分析仪 观察RNA的完整性。28S 与18S 两条电泳条带的显色强度之比约为2:1,提示所提取的 RNA完整而没有降解。
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