1 用同一条标准曲线套所有细胞
HEK-293和HepG2的转染条件可能相差2-3倍。每次换细胞系、换试剂批次、甚至换胎牛血清批次，都应该做一轮参数优化。
2 不做阳性对照
如果你每次转染都失败，分不清问题是出在转染试剂上还是你的目的基因质粒上。
稳妥的做法是：用一个已知高效的报告基因质粒（如GFP或荧光素酶）作为阳性对照，同步转染。阳性对照效率正常，说明问题是你的目的基因质粒本身。
3 忽略了双荧光素酶共转染时的比例
如果你在做启动子活性分析等需要共转染的工作，内部对照质粒的用量不能太大。
建议目的质粒:对照质粒的比例在10:1到100:1之间，避免对照质粒的强启动子与目的质粒的调控元件发生顺式干扰[1]。
4 用传代次数过高或恢复期不足的细胞
从液氮复苏后直接转染是不行的。
冻存对细胞膜是一种损伤，复苏后的细胞需要至少传2-3代才能真正恢复最佳状态。
另外，同一株细胞连续传代超过50次后，其生物学特性可能已经发生改变，此时之前的优化参数可能全部失效。
建议每一批细胞在使用前标注代数，或者提前冻存一批低代次的种子细胞。
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