判断细胞转染是否成功,有以下几种方法:
1 观察荧光
如果转染进去的质粒携带GFP等荧光报告基因,就可以通过观察荧光来判断。
视野中发荧光的细胞就是你转染效率的直观体现。但需要注意的是,荧光强弱不一定等于表达量高低——它受激发光强度、曝光时间等多种因素影响。
2 流式分析
此外,流式也可以确认转染效果。转染后收集细胞,用流式检测荧光阳性比例。60%以上的阳性率通常被认为是满意结果,但对于难转染的细胞系,30-40%也可能已经是很好的效率了。
3 化学发光检测
如果质粒是带荧光素酶等报告基因,我们可以通过裂解细胞后,加入反应底物,催化化学发光,然后读数就可以定量评估转染效率。
比如双荧光素酶系统(如海肾+萤火虫),这个系统由于引入了内部对照质粒,在评估转染效果时,可以排除细胞数和操作差异带来的干扰,数据更可靠。
4 Western blot检测
如果转染的是目的基因表达质粒,直接在蛋白水平验证是最有说服力的方式。
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