冰冻切片（Cryosectioning）是将组织样本在冷冻状态下快速切片的方法，用于组织学和分子生物学分析。此技术常用于免疫组化、免疫荧光、核酸杂交和其他染色技术。
冰冻切片技术路线
1.组织取材与处理
• 样本采集：取新鲜组织样本，尽可能避免污染和损伤。
• 固定（可选）：若需固定，使用4%多聚甲醛溶液固定10-30分钟（视组织类型而定），然后用PBS漂洗去除固定剂。
• 预冷：将组织样本放在冷冻切片机（cryostat）内预冷10-15分钟。
2.包埋与冷冻
• 包埋：将组织放在含有OCT（Optimal Cutting Temperature compound）包埋剂的模具中。
• 快速冷冻：将包埋好的模具浸入液氮或干冰丙酮混合物中，快速冷冻以防止冰晶形成，保持组织结构。
3.切片
• 切片温度设定：在冷冻切片机中，设定适合的温度（通常为-20°C至-30°C）。
• 切片厚度：选择合适的切片厚度（通常为5-10 μm），将组织切片。
• 贴片：将切下的组织片用刷子或镊子轻轻移至载玻片上。
4.干燥和储存
• 快速干燥：将载玻片置于室温下或干燥箱内几分钟以干燥切片。
• 储存：切片可立即用于染色或短期内储存在-20°C下用于后续分析。
冰冻切片技术优点
1.快速高效：无需长时间固定和脱水处理，快速制备和分析，适合临床快速诊断和即时分析。
2.保护抗原性：由于固定时间短或无需固定，组织抗原性和酶活性更好地保留，适合免疫组化和免疫荧光实验。
3.结构保存良好：冷冻切片避免了传统石蜡切片中的高温处理，组织结构保存更加真实。
4.适用于脂质和糖原：脂质和糖原在冷冻切片中不被提取，适合脂肪组织或糖原的研究。
5.多用途性：冰冻切片可用于多种染色技术，包括H&E染色、酶组织化学、免疫组化和荧光染色。
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