扫描电镜(Scanning Electron Microscopy, SEM)是通过扫描电子束来成像样本表面形貌的技术,广泛用于材料科学和生物学研究。
扫描电镜技术路线
1.样本准备
• 固定:将生物样本用2.5%戊二醛固定数小时至过夜,维持细胞结构。
• 冲洗:使用PBS缓冲液冲洗去除固定剂残留。
• 二次固定(可选):用1%锇酸进一步固定,增强样本的电导性和结构稳定性。
2.脱水
• 梯度乙醇脱水:逐步增加乙醇浓度(30%-100%),每步10-15分钟,最后在100%乙醇中脱水数次。
• 临界点干燥:使用CO₂临界点干燥法,避免表面张力导致样本结构损坏。
3.镀金
• 导电处理:将样本表面镀上一层薄金膜或碳膜,提高样本导电性,减少电子束积累和电荷积累。
4.观察和成像
• 安装样本:将处理好的样本安装在样本台上,放入SEM腔体中。
• 调节参数:设置加速电压、工作距离等参数,调整电子束焦点。
• 成像和拍照:通过扫描电子束观察样本表面形貌,获取高分辨率图像。
扫描电镜技术优点
1.高分辨率:SEM提供纳米级别的表面成像能力,适合细胞表面微观结构和组织形态学研究。
2.立体成像:能获得样本表面的三维形貌信息,适合研究样本的表面特征和形态。
3.样本范围广:适用于生物样本、材料科学样本等多种类型样本的成像分析。
4.多功能性:可进行元素分析、成分分析(EDX)等多种扩展实验。
5.图像质量高:提供高对比度和清晰度的图像,有助于精确的形态学分析。
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