透射电镜(Transmission Electron Microscopy, TEM)用于观察超薄样本的内部结构,适合细胞、组织和纳米材料的超微结构研究。
透射电镜技术路线
1.样本固定
• 初步固定:用2.5%戊二醛在4°C固定样本数小时至过夜。
• 冲洗:用PBS或其他缓冲液冲洗去除固定剂。
• 二次固定:用1%锇酸固定1-2小时,提高样本的电导性和结构稳定性。
2.脱水
• 梯度乙醇脱水:逐步增加乙醇浓度,最后在100%乙醇中完全脱水。
3.包埋
• 渗透和包埋:用环氧树脂渗透样本,使其硬化和稳定,适合超薄切片。
• 聚合:将包埋样本在60°C下聚合数小时至过夜。
4.超薄切片
• 切片:使用超薄切片机将包埋样本切成50-70 nm的超薄切片。
• 上网和染色:将切片放在铜网上,用醋酸铀和柠檬酸铅染色以增加对比度。
5.观察和成像
• 样本加载:将染色好的样本网安装在TEM样本台上,放入TEM腔体中。
• 调整参数:设置加速电压、光圈和透镜电流,调整电子束焦点。
• 成像和拍照:通过电子束透射样本,获取内部超微结构图像。
透射电镜技术优点
1.超高分辨率:TEM能够达到原子级分辨率,适合观察细胞、病毒和纳米材料的超微结构。
2.内部结构成像:可以观察样本内部的详细结构,包括细胞器、病毒颗粒、纳米材料等。
3.对比增强:通过染色提高样本的电子密度差异,获得高对比度图像。
4.元素分析:可结合能谱分析(EDS)进行元素分布分析。
5.研究多样性:适用于生物学、材料科学、纳米技术等领域的超微结构研究。
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