血管形成实验（Angiogenesis Assay）是一种用于评估细胞（通常是内皮细胞）在体外形成毛细血管样结构的能力的技术。该实验模拟体内血管生成过程，广泛用于研究肿瘤血管生成、药物筛选、基因功能分析等领域。下面是血管形成实验的基本流程，通常以Matrigel血管生成实验为例。
1.实验设计
• 实验目的：确定特定条件（如药物处理、基因操作、蛋白因子）对内皮细胞血管生成能力的影响。
• 选择细胞系：通常使用人脐静脉内皮细胞（HUVECs），也可以使用其他类型的内皮细胞系。
• 设置实验组和对照组：包括处理组（如药物处理、基因敲低/过表达）和阴性对照组（无处理或溶剂处理）。
2. Matrigel预处理
• 将Matrigel从-20°C冻存条件下转移到4°C冰箱中过夜解冻。
• 在冰上操作，取出解冻的Matrigel并充分混匀，避免产生气泡。
• 使用预冷的移液器，将合适体积（如96孔板中每孔50 µl，24孔板中每孔100-200 µl）的Matrigel均匀地铺在板孔底部。
• 小心避免气泡的产生，确保Matrigel覆盖均匀。
• 将铺有Matrigel的板置于37°C培养箱中孵育30-60分钟，使其固化。
3. 内皮细胞准备
• 将内皮细胞培养至对数生长期，确保细胞健康。
• 用PBS洗涤细胞两次，消化细胞（如使用胰蛋白酶-EDTA溶液），离心收集。
• 用内皮细胞培养基重悬细胞，并调整细胞密度（通常为2-5 × 10^4个细胞/ml）。
4. 细胞接种
• 轻轻将内皮细胞悬液加入已固化的Matrigel上，每孔加入合适体积（如96孔板中每孔100-200 µl，24孔板中每孔500 µl）。
• 轻轻摇动培养板，使细胞均匀分布在Matrigel表面。
• 将培养板置于37°C、5% CO2的培养箱中孵育。
5. 药物处理或基因操作
• 按实验设计，将特定药物或基因操作处理加入细胞培养基中。
• 设置对照组（如溶剂处理）和实验组（如特定浓度的药物或基因操作）。
• 药物处理时间通常为6-24小时，具体时间视实验目的和细胞类型而定。
6. 显微镜观察和图像拍摄
• 在不同时间点（如6小时、12小时、24小时）使用倒置显微镜观察细胞的管状结构形成情况。
• 通过显微镜拍摄每个视野下的图像，以记录血管形成的过程和效果。
• 如果使用荧光染料（如Calcein AM）对细胞进行标记，可使用荧光显微镜进行观察，以提高对细胞和管状结构的可视化。
7. 图像分析
• 使用图像分析软件（如ImageJ）测量血管形成的相关指标，如总管长、分支点数量、节点数目等。
• 定量分析各组之间的差异，评估药物或基因操作对血管生成的影响。
地址：江苏省常州市中国科学院遗传研究中心 | 咨询热线：15189799066 | 销售咨询邮箱：sales@cellecx.com
技术支持邮箱：support@cellecx.com | 售后服务邮箱：service@cellecx.com
Copyright © 2024 江苏知源解码生物科技有限公司 All Rights Reserved. | 技术支持：互邦网络
地址：江苏省常州市中国科学院遗传研究中心
咨询热线：15189799066
销售咨询邮箱：sales@cellecx.com
技术支持邮箱：support@cellecx.com
售后服务邮箱：service@cellecx.com
Copyright © 2024 江苏知源解码生物科技有限公司 All Rights Reserved.
技术支持：互邦网络