细胞迁移 (Cell migration) 也称为细胞爬行、细胞移动或细胞运动,是指细胞在接收到迁移信号或感受到某些物质的梯度后而产生的移动。细胞迁移是细胞的基本功能之一,在胚胎发育、血管生成、伤口愈合、免疫反应、炎症反应、癌症转移等过程中发挥重要作用。
细胞划痕实验(Cell scratch assay)是测定细胞迁移能力的常用方法,在融合的单层细胞上人为制造一个划痕,划痕边缘的细胞会逐渐进入划痕区域使细胞重新融合,通过延时显微镜定期捕获细胞迁移图像,可用于观察药物、基因等外源因素对细胞迁移、修复和细胞相互作用的影响。
实验步骤
1.划线:在培养板底面顺直尺画三条横线,便于后续辅助直线划痕。
2.种板:根据细胞生长速度和状态确定接种量,原则为过夜后细胞融合率达到100%。
3.划痕:待细胞长满后,用200ul枪头垂直于孔板划线,划痕与标记线垂直或平行。
4.清洗:弃去旧培养基和划下的细胞,用PBS轻轻润洗两到三次。
5.加液:根据实验需求分组加入特定的培养基或无血清培养基。
6.拍照:细胞放入37℃ 5%CO2培养箱中培养,以作为0h对照,在所需时间点取出细胞观察并拍照。
7.数据分析:用ImageJ软件来进行分析划痕面积或细胞间距离变化情况。
注意事项
1.为了降低细胞增殖对实验结果的影响,可采用无血清或低血清培养液抑制细胞增殖。
2.使用枪头手动划痕难以保证不同组间划痕宽度一致,此外手动划痕会损伤划痕处细胞活力或刮坏培养板表面,影响细胞迁移;采用culture Insert制造细胞划痕可以避免手动划痕的劣势。

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