血管形成实验

更新时间:2025-12-01    浏览量:0

01

实验原理

内皮细胞保留了分裂和快速迁移的能力,可响应血管生成信号。

02

血管形成一般使用哪些细胞?

多种类型的内皮细胞均可用于本实验,包括原代细胞和永生化细胞系。常用的有“人脐静脉内皮细胞(HUVEC)”,之所以不采用静脉血管内皮细胞与动脉血管内皮细胞是因为HUVEC具有干细胞的潜能,理论上可以传代50-60次。此外小鼠3B-11细胞、小鼠SVEC4-10细胞或原代内皮细胞也可用于血管形成实验。

03

实验操作步骤

a.实验准备与材料

准备:实验前一天将Matrigel置于冰盒中,放入冰箱过夜,4℃温度,使胶缓慢融化。同样提前将枪头、EP管、96孔板放入4℃度冰箱中预冷。

b.分装:将冻融的Matrigel进行分装,并用预冷枪头混匀,以300ul/管分装到EP管中,整个过程始终是在冰盒中进行。

C.铺胶:将96孔板放在冰盒上,以每孔50ul把基质胶加到96孔板内,避免产生气泡,加完稍微摇晃均匀放在4℃冰箱中静置20-30min,再放入37℃细胞培养箱中1h等待凝固。

d.收集:当内皮细胞达到80%时汇合度后准备消化,收集细胞进行计数,并按照稀释调整细胞的密度(初次实验设置细胞密度建议:3~10*10^4细胞);

e.观察:96孔板加入100ul的细胞悬液,做好标记后放入37℃细胞培养箱常规培养。四小时后可见血管形成。在镜下观察并拍照,时间为14~18h。结果分析。

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