引物合成-分子生物学检测-江苏知源解码生物科技有限公司

引物合成是根据目标DNA序列设计和合成特异性寡核苷酸的过程，是PCR、测序、克隆等分子生物学实验的基础步骤。以下是引物合成的基本流程及其优点：

引物合成技术路线

1.引物设计

• 序列选择：根据目标基因的序列，设计前向和反向引物，通常长度为18-25个碱基。

• 设计原则：考虑引物的Tm值、GC含量、二级结构和发夹结构的避免，确保特异性结合和高效扩增。

2.在线工具辅助设计

• 使用软件工具：使用在线引物设计工具（如Primer、OLIGO）优化引物序列。

• BLAST比对：通过BLAST比对验证引物的特异性，避免非特异性结合到其他基因。

3.合成引物

• 引物订购：将设计好的引物序列提交给商业合成公司进行合成。公司通常提供脱盐纯化的引物。

• 引物纯化：若有需求，可选择进一步的PAGE或HPLC纯化以获得高纯度引物。

4.引物溶解

• 引物溶解和稀释：将干燥的引物溶解在无RNase、DNase的无菌水中，制备工作浓度（通常为10-20 μM）的引物储备液。

5.引物验证

• PCR扩增测试：使用合成的引物进行PCR扩增测试，验证其扩增效率和特异性。

• 电泳检测：通过琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物大小和条带强度。

引物合成技术优点

1.高特异性：通过精心设计和在线工具优化，引物可以专一性识别目标序列，减少非特异性扩增。

2.快速合成：现代合成技术能够快速、大规模地生产高质量引物，满足科研和临床需求。

3.灵活性强：引物长度和序列可以根据实验需求定制，适用于各种分子生物学实验，如qPCR、测序和克隆。

4.高效性：优化的引物具有高扩增效率，保证了PCR反应的灵敏度和准确性。

5.广泛应用：合成引物技术适用于基因检测、病原体检测、基因表达分析、基因编辑等广泛应用领域。

地址：江苏省常州市中国科学院遗传研究中心 | 咨询热线：15189799066 | 销售咨询邮箱：sales@cellecx.com

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