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细胞增殖实验是一种用于研究细胞生长和分裂能力的实验技术，常用于检测药物、基因操作或其他外界因素对细胞增殖的影响。以下是细胞增殖实验的基本技术流程：
1. 实验设计
• 明确实验目的，例如检测某种药物、基因操作、环境条件对细胞增殖的影响。
• 选择适合的细胞系，如癌细胞系（HeLa、MCF-7等）或正常细胞系（如成纤维细胞）。
• 确定实验组和对照组，并设定加药浓度和处理时间。
2. 细胞准备
• 细胞培养：将细胞种植在适合的培养容器中（如96孔板、24孔板或6孔板），使其生长至约70-80%汇合，确保细胞状态健康。
• 细胞接种：按照实验设计的密度（如每孔2000-5000个细胞），将细胞均匀接种到孔板中，轻轻摇动以均匀分布细胞。
• 孵育：将细胞置于培养箱中孵育（通常37°C，5% CO2）24小时，以确保细胞贴壁和恢复。
3. 处理和加药
• 按实验设计，加入不同浓度的药物、转染试剂或其他处理物质。
• 设置对照组，如无处理的空白对照组、仅加入溶剂的对照组（如DMSO对照）。
• 轻轻摇动培养板以确保均匀混合。
• 在处理后将细胞继续放回培养箱中孵育，根据实验要求选择不同的时间点（如24小时、48小时、72小时）进行观察。
4. 细胞增殖检测方法
• MTT法（甲基噻唑基四氮唑）：MTT法是一种经典的检测细胞活性和增殖的方法，通过测定细胞代谢产生的还原型蓝色结晶来反映细胞数量。
• 向每个孔中加入适量的MTT溶液（通常为0.5 mg/ml），并在培养箱中孵育2-4小时。
• 孵育结束后，吸弃培养基并加入DMSO溶解形成的蓝色甲臢结晶。
• 在酶标仪上测定570 nm处的吸光度，吸光度值与细胞数量成正比。
• CCK-8法（细胞计数试剂盒-8）：CCK-8法是一种更灵敏且更方便的增殖检测方法，不需要溶解步骤。
• 加入CCK-8试剂到每个孔中（通常10 μl CCK-8溶液+100 μl培养基），轻轻混匀。
• 在培养箱中孵育1-4小时，根据培养基颜色变化决定终止时间。
• 使用酶标仪测定450 nm处的吸光度。
• EdU掺入法：EdU（5-ethynyl-2'-deoxyuridine）掺入法是一种检测DNA合成的增殖方法，通过EdU掺入新合成的DNA链。
• 加入EdU工作溶液到细胞培养基中，并在培养箱中孵育1-2小时。
• 使用Click-iT反应进行荧光标记检测EdU掺入量，荧光强度与细胞增殖速率成正比。
• BrdU掺入法：BrdU（溴脱氧尿苷）掺入法是另一种检测DNA合成的经典方法。
• 在细胞培养基中加入BrdU，孵育一定时间。
• 通过免疫荧光或ELISA法检测BrdU掺入量。
5. 数据收集与分析
• 记录每个实验组在不同时间点的吸光度或荧光值。
• 计算细胞增殖率，相对增殖率或细胞存活率。
• 使用统计学方法（如t检验、ANOVA）比较实验组与对照组之间的差异。
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