实验原理
细胞迁移实验是研究细胞在体外条件下移动能力的一种实验方法,广泛应用于细胞生物学、肿瘤学和免疫学等领域。细胞迁移实验基于细胞对环境变化的反应能力,这些变化可以是物理的(如空间间隙)或化学的(如梯度差)。实验目的是模拟并观察细胞如何在这些条件变化下移动,从而了解细胞迁移的机制和影响因素。

实验步骤
取处理好的细胞,加入1mIPBS清洗细胞,0.25%胰酶分别消化收集1000-1500mmp 离心3-5 min,去上清;
加入1ml PBS润洗两次,清洗掉残余血清,去上清;
无血清培养基重悬细胞,细胞计数板计数,无血清培养基稀释细胞浓度至3x10^5cell/ml,备用;
在24孔板中预先加入800μl 10%FBS的培养基(含双抗),并放入transwel小室,1h后在transwel上室分别接入200μl各组细胞悬液,37℃,5%CO培养箱培养24h;
取出transwell,用PBS小心清洗小室一遍,用70%冰乙醇溶液固定细胞1h;
用0.5%结晶紫染液染色,室温中放置20min,PBS清洗一下,用于净的球将上室一侧的未迁移的细胞擦干净;
显微观察拍照,200倍照片,3张/组。
注意事项
合理控制细胞数量是取得实验成功的关键,正式实验前可先做预实验,摸索适当的密度,不然可能会影响结果的准确性。
在取出小室孔板进行观察前,先用PBS冲洗,以去除未贴附或悬浮的细胞,洗完后应立即固定染色,防止细胞过于干燥,染色时间也不能太长或太短。
小室需确认放平于孔板中且细胞悬液要混匀,建议滴加,整个实验过程中小室勿倾斜晃动,以防止细胞铺不均匀。
滴加细胞悬液的过程中要注意防止气泡产生。
细胞小室孔板的孔径选择:8μm规格适配实体瘤细胞的跨膜运动分析,而3μm微孔系统则专用于淋巴细胞亚群的定向趋化行为检测。
地址:江苏省常州市中国科学院遗传研究中心 | 咨询热线:15189799066 | 销售咨询邮箱:sales@cellecx.com
技术支持邮箱:support@cellecx.com | 售后服务邮箱:service@cellecx.com
Copyright © 2024-2025 江苏知源解码生物科技有限公司 All Rights Reserved. | 技术支持:互邦网络
地址:江苏省常州市中国科学院遗传研究中心
咨询热线:15189799066
销售咨询邮箱:sales@cellecx.com
技术支持邮箱:support@cellecx.com
售后服务邮箱:service@cellecx.com
Copyright © 2024-2025 江苏知源解码生物科技有限公司 All Rights Reserved.
技术支持:互邦网络